Apatinib (YN968D1) mesylate

Apatinib (YN968D1) es un novedoso inhibidor selectivo, biodisponible por vía oral, con posibles actividades antiangiogénicas y antineoplásicas. Apatinib se une selectivamente e inhibe el VEGFR2. Apatinib también puede suprimir potentemente las actividades de Ret, c-kit y c-src con IC50 de 0,013 μM, 0,429 μM y 0,53 μM, respectivamente. Apatinib inhibe la fosforilación celular de VEGFR-2, c-kit y PDGFRβ. Apatinib inhibe significativamente la proliferación estimulada por 20 ng/mL de VEGF (IC50 = 0,17μM). Apatinib inhibe eficazmente la proliferación, migración y formación de tubos de células endoteliales de vena umbilical humana inducidas por FBS, y bloqueó la brotación del anillo aórtico de rata. [1] Apatinib revierte la MDR mediada por ABCB1 y ABCG2 al inhibir su función de transporte, pero no al bloquear la vía AKT o ERK1/2 o al regular a la baja la expresión de ABCB1 o ABCG2. Apatinib potencia significativamente la citotoxicidad de los sustratos establecidos de ABCB1 y ABCG2 y aumentó la acumulación de DOX y Rho 123 en células que sobreexpresan ABCB1 o ABCG2. Además, apatinib inhibió significativamente el marcaje por fotoafinidad tanto de ABCB1 como de ABCG2 con [¹²⁵I]iodoarilazidoprazosina de manera concentración-dependiente. [2]

Apatinib inhibe el crecimiento de una amplia gama de xenoinjertos tumorales humanos de manera significativa y dosis-dependiente. [1] Apatinib revierte la MDR mediada por ABCB1 en el modelo de xenoinjerto de ratón desnudo. [2] Apatinib mejora significativamente la actividad antitumoral de la doxorrubicina en ratones desnudos que albergan xenoinjertos K562/ADR. [3]

• Ensayo inmunoenzimático

  Como solución de sustrato que contiene tirosina se utiliza un copolímero aleatorio de poli(glu, ala, tyr) 6:3:1. El sustrato se almacena como una solución madre de 1 mg/mL en PBS a -20 °C y se diluye 1 en 500 con PBS para recubrir placas de 96 pocillos (100 μL/pocillo). Las placas se recubren el día anterior al ensayo, se sellan con sellos adhesivos y se almacenan durante la noche a 4 °C. El día del ensayo, se desecha la solución de sustrato y los pocillos de la placa de ensayo se lavan una vez con PBST (PBS que contiene 0,05% v/v de Tween 20) y una vez con tampón Hepes (50 mM, pH 7,4). Los compuestos de prueba se diluyen con agua desionizada con 10% de DMSO y se transfieren 25 μL a los pocillos de las placas de ensayo lavadas. Luego se añade solución de cloruro de manganeso (40 mM) que contiene 8 μM de ATP (25 μL) a todos los pocillos de prueba. También se incluyen pocillos de control y en blanco, que contienen diluyente de compuesto y solución de cloruro de manganeso con y sin ATP, respectivamente, para determinar el rango dinámico del ensayo. Se añade enzima recién diluida (50 μL) a cada pocillo, y las placas se incuban a temperatura ambiente durante 20 min. Luego se desecha el líquido y los pocillos se lavan dos veces con PBST. Se añade anticuerpo IgG anti-fosfotirosina de ratón diluido 1:6000 con PBST que contiene 0,5% (p/v) de albúmina sérica bovina (BSA) (100 μL/pocillo), y las placas se incuban durante 1h a temperatura ambiente antes de desechar el líquido y lavar los pocillos dos veces con PBST. Luego se añade anticuerpo Ig anti-ratón de oveja ligado a peroxidasa de rábano picante (HRP) diluido 1:500 con PBST que contiene 0,5% (p/v) de BSA (100 μL/pocillo) y las placas se incuban durante 1 h adicional a temperatura ambiente antes de desechar el líquido y lavar los pocillos dos veces con PBST. Se prepara una solución de 1 mg/mL de ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico fresca en tampón fosfato-citrato de 50 mM (pH 5,0) que contiene 0,03% (p/v) de perborato de sodio, y se añaden 100 μL a cada pocillo. Luego las placas se incuban durante 20-60 min a temperatura ambiente hasta que el valor de densidad óptica de los pocillos de control medido a 405 nm sea aproximadamente 1,0. Los valores de IC50 para la inhibición enzimática del compuesto se interpolan utilizando Microcal Origin después de la sustracción de los valores en blanco.

• Líneas celulares

  HUVEC

• Concentraciones

  ~25 μM

• Tiempo de incubación

  72 h

• Método

  The HUVEC are seeded into 96-well plates. After 24 h of incubation, cells are exposed to the test agents (vehicle as control) together with 20 ng/mL VEGF or 20% FBS for another 72 h. After fixation with 10% trichloroacetic acid, the cells are stained with 0.4% sulforhodamine B for 30 min at 37 °C and then washed with 1% acetic acid. Tris is added to dissolve the complex, and the optical density is measured at 520 n

• Modelos animales

  Ls174t, HCT 116, SGC-7901, HT-29, A549, NCI-H460 xenografted BALB/cA nude mice

• Dosificaciones

  50, 100, 200 mg/kg

• Administración

  p.o.