AZD7762

AZD7762, un inhibidor más selectivo de Chk1, inhibe la fosforilación de Chk1 de un péptido cdc25C al unirse reversiblemente al sitio de unión de ATP de Chk1, con una IC50 de 5 nM y un K_i de 3.6 nM. Este compuesto induce la detención celular con una EC50 de 0.620 μM, y anula significativamente la detención G2 inducida por camptotecina con una EC50 de 10 nM, al bloquear la degradación dependiente de Chk1 de Cdc25A y la activación de la Ciclina A. Él (300 nM) mejora la eficacia antitumoral contra SW620 y contra MDA-MB-231 al reducir los valores de GI50 de 24.1 nM y 2.25 μM a 1.08 nM y 0.15 μM, respectivamente. [1] Este químico muestra citotoxicidad contra una variedad de líneas celulares de neuroblastoma que presentan p53 de tipo salvaje, mutación de p53, amplificación de Mdm2 o deleción de p14 con valores de IC50 que van desde 82.6-505.9 nM. [2]

AZD7762 solo a 25 mg/kg muestra poca actividad antitumoral en ratones con xenoinjertos H460-DNp53 y ratones con xenoinjertos SW620, pero cuando se administra en combinación, este compuesto muestra una eficacia antitumoral significativa en los dos xenoinjertos de ratones con una log cell kill de 0.9 o un porcentaje tratado/control (%T/C) de 26 incluso a dosis bajas de 12.5 mg. La dosificación de este químico en combinación en la rata con xenoinjerto H460-DNp53 inhibe el volumen del tumor de manera dependiente de la dosis con valores de %T/C de 48 y 32 para 10 y 20 mg/kg, respectivamente. Este compuesto (25 mg/kg) en combinación causa una regresión tumoral completa en los ratones con xenoinjerto SW620 con el %T/C aumentando significativamente a -66% y -67%, respectivamente. [1]

• Ensayo de Chk1 Kinase

  La Chk1 humana recombinante se expresa como una fusión de S-transferasa en células de insecto usando un vector de baculovirus y se purifica por cromatografía de afinidad. Se sintetiza un péptido sintético sustrato (N-biotinilaminohexanoil-KKVSRSGLYRSPMPENLNRPR) para Chk1. Las concentraciones finales del ensayo de péptido y ATP (frío + 40 nCi [³³P]ATP) son 0,8 y 1 μM, respectivamente. Diferentes concentraciones de este compuesto, tampón que contiene el péptido y la Chk1 quinasa y ATP, se añaden secuencialmente a una placa de ensayo de 384 pocillos. La placa se incuba durante 2 horas, la reacción se detiene añadiendo tampón que contiene EDTA y perlas de ensayo de proximidad por centelleo, y las placas se leen usando un lector TopCount. El análisis de datos se realiza para determinar una respuesta a la dosis (IC50).

• Líneas celulares

  HT29, SW620 and MDA-MB-231 cells

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentration ~12.5 μM

• Tiempo de incubación

  20 or 48 hours

• Método

  For the checkpoint abrogation assay, HT29 cells are treated for 2 hours with camptothecin (topoisomerase I inhibitor; 0.07 μg/mL) to induce the G2 checkpoint. Cells are then treated for 20 hours with a 12-point titration of AZD7762 (12.5 μM to 6 nM) plus nocodazole. Cells are fixed with 3.7% formaldehyde for 1 hour, permeabilized with PBS containing 0.05% Triton X, and incubated with anti-phH3 antibody for 1 hour followed by Alexa Fluor 488 anti-rabbit and Hoechst stain for 1 hour. Mitotic index is determined on the ArrayScan and expressed as the percentage of cells undergoing mitosis. For the potentiation assays, SW620 or MDA-MB-231 cells are dosed for 24 hours with a 9-point titration of ranging from 0.01 to 100 nM with a constant dose of this compound (300 nM). After 24 hours, medium is removed and this chemical alone is added back to the wells for an additional 24 hours. Cells are then incubated in this compound-free medium for an additional 72 hours. The effect on cell proliferation is determined by MTT.

• Modelos animales

  Male NCr mice implanted s.c. with H460-DNp53 cells or SW620, and male rnu rats implanted s.c. with H460-DNp53 cells

• Dosificaciones

  ~25 mg/kg

• Administración

  Injection i.v.