Saracatinib (AZD0530)

Saracatinib (AZD0530) también inhibe potentemente otros miembros de la familia de tirosina quinasas Src, incluyendo c-Yes, Fyn, Lyn, Blk, Fgr y Lck con IC50 de 4-10 nM. Inhibe sensiblemente Src Y530F NIH 3T3 con una IC50 de 80 nM. Este compuesto deteriora significativamente la invasión de células HT1080 a través de una matriz de colágeno tridimensional e inhibe completamente la dispersión celular inducida por EGF en células de cáncer de vejiga NBT-II. [1] Inhibe potentemente la activación de Src en células DU145 y PC3, a través de la inhibición de la fosforilación de Y419. Inhibe el crecimiento del cáncer de próstata incluyendo PC3, DU145, CWR22Rv1 y LNCaP, mientras muestra baja actividad en células LAPC-4, PZ-HPV7 y RWPE-1. Induce la detención del ciclo celular en G1/S pero no la escisión de la caspasa 3. También inhibe significativamente la migración de DU145 y PC3 en la cámara de Boyden. [2] Proporciona un bloqueo potente y sostenido de AKT y mejora la sensibilidad a la irradiación en células A549 y Calu-6. [3] Inhibe el osteoclasto en actividad, resorción y formación. También previene reversiblemente la migración de precursores de osteoclastos. [4]

Saracatinib (AZD0530) muestra una gran inhibición del crecimiento tumoral en aloinjertos de Src3T3 y un retraso moderado del crecimiento en xenoinjertos de Calu-6, MDA-MB-231, AsPc-1 y BT474C. [1] Este compuesto también muestra una gran actividad antitumoral en ratones con xenoinjertos ortotópicos de DU145 a una dosis de 25 mg/kg (administrado oralmente, diariamente). [2]

• Ensayo de quinasa

  La IC50 de la actividad de la tirosina quinasa se mide mediante un ensayo inmunoenzimático (ELISA) con dominios catalíticos recombinantes de un panel de receptores y tirosina quinasas no receptores (en algunos casos, solo se usa parte del dominio catalítico). Este compuesto se dosifica en un rango de 0,001-10 mM. Los ensayos de especificidad contra un panel de serina/treonina quinasas se realizan utilizando un ensayo de captura por filtro con ³²P. Brevemente, las placas multidrop 384 que contienen 0,5 μL de Saracatinib (AZD0530) o controles (solo DMSO o controles de tampón de pH 3,0) se incuban con 15 μL de enzima más péptido/sustrato proteico durante 5 min antes de que la reacción se inicie mediante la adición de 10 μL de 20 mM de Mg-ATP. Para todas las enzimas, la concentración final se aproxima a la constante de Michaelis (K_m). Los ensayos se realizan durante 30 min a temperatura ambiente antes de la terminación mediante la adición de 5 μL de ácido ortofosfórico. Después de mezclar, los contenidos de los pocillos se recogen en una placa P81 Unifilter, utilizando ácido ortofosfórico como tampón de lavado. Luego se calcula la IC50.

• Líneas celulares

  PC3, DU145, CWR22Rv1, LNCaP, LAPC-4, PZ-HPV7 and RWPE-1 cells

• Concentraciones

  62.5 nM - 16 mM

• Tiempo de incubación

  1, 3 and 5 days

• Método

  After seeding cells at a density of 2×10³ in 96-well plates and incubating overnight, Saracatinib (AZD0530) (62.5 nM-16 mM) is added. After 1, 3 and 5 days, culture medium is removed followed by addition of 0.2 mL DMSO per well and continuous shaking of plates at 200 rotations per minute for 15min. Then IC50 is measured by MTT metho

• Modelos animales

  CB17 mice are implanted with DU145 cells.

• Dosificaciones

  25 mg/kg

• Administración

  Orally administered daily