AT9283

AT9283 induce un fenotipo poliploide claro al inhibir la actividad de Aurora B kinase en células HCT116 con una IC50 de 30 nM. Además, este compuesto también produce una potente inhibición en la formación de colonias de HCT116. [1]

En ratones con xenoinjertos de carcinoma de colon humano HCT116, el tratamiento con AT9283 (15 mg/kg y 20 mg/kg) durante 16 días resulta en una inhibición significativa del crecimiento tumoral del 67% y 76%, respectivamente. Además, este compuesto también exhibe una vida media significativamente más larga en tumores (2,5 horas) en comparación con el plasma (0,5 horas) y una biodisponibilidad oral modesta en ratones (Fp.o. = 24%). [1]

• Ensayos de Aurora A y Aurora B Kinase

  Los ensayos para Aurora A y B se realizan en formato DELFIA. La enzima Aurora A se incuba con AT9283 y 3 μM de sustrato cross-tide (biotina-CGPKGPGRRGRRRTSSFAEG) en 10 mM MOPS, pH 7, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glicerol, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl₂, 0,01% β-mercaptoetanol, 15 μM ATP y 2,5% DMSO. La enzima Aurora B se incuba con este compuesto, 3 μM del sustrato anterior en 25 mM Tris, pH 8,5, 5 mM MgCl₂, 0,1 mg/mL BSA, 0,025% Tween-20, 1 mM DTT, 15 μM ATP y 2,5% DMSO. Las reacciones se dejan proceder durante 60 minutos y 45-90 minutos para Aurora A y Aurora B, respectivamente, antes de ser detenidas con EDTA. Las mezclas de reacción se transfieren luego a una placa recubierta de neutravidina, y el péptido fosforilado se cuantifica mediante un anticuerpo fosfo-específico y un anticuerpo secundario marcado con europio utilizando fluorescencia resuelta en el tiempo (excitación, 337 nm; emisión, 620 nm). Los valores de IC50 para los compuestos de control son 92 nM (ensayo de Aurora A) y 17 nM (ensayo de Aurora B).

• Líneas celulares

  HCT 116 cells

• Concentraciones

  1 nM - 10 μM

• Tiempo de incubación

  72 hours

• Método

  HCT 116 cells are cultured in DMEM + 10% FBS + GLUTAMAX I. Black 96-well flat-bottomed (clear) tissue culture treated plates are seeded in 200 μL of medium and incubated for approximately 16 hours at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO₂ in air. Cells are treated with test compound at nine different concentrations (spanning 1 nM to 10 μM, plus DMSO vehicle control) and then incubated for 72 hours. Polyploidy morphological observations of the cells are then noted. The concentration of AT9283 required to produce a distinct polyploid phenotype is reported. Cells are seeded at a concentration of 75−100 cells/mL relevant culture media onto 6- or 24-well tissue culture plates and allowed to recover for 16 hours. This compound (11 concentrations spanning 0.1 nM to 10 μM) or vehicle control (DMSO) is added to duplicate wells to give a final DMSO concentration of 0.1%. Following compound addition, colonies are allowed to grow between 10 and 14 days for optimum discrete colony counting. Colonies are fixed in 2 mL of Carnoys fixative (25% acetic acid, 75% MeOH) and stained in 2 mL of 0.4% w/v crystal violet. The numbers of colonies in each well is counted. IC50 values are calculated by sigmoidal dose-response (variable slope) IC50 curves using Prism Graphpad software.

• Modelos animales

  HCT116 cells are injected s.c. Into the hind flank of male BALB/c mice.

• Dosificaciones

  15 mg/kg and 20 mg/kg

• Administración

  Administered via i.p.