AG-490

AG-490 inhibe la proliferación celular impulsada por HER-2 con una IC50 de 3,5 μM. [1] Correspondiendo a la inhibición específica dependiente de la dosis de JAK2 activado constitutivamente en células de leucemia linfoblástica aguda (LLA) pre-B, este compuesto (5 μM) bloquea casi completamente el crecimiento de todas las células LLA al inducir la muerte celular programada, sin efectos deletéreos sobre la hematopoyesis normal. Este químico no inhibe las actividades de Lck, Lyn, Btk, Syk y Src. [2] Él (60-100 μM) bloquea la activación constitutiva de Stat3sm e inhibe el crecimiento espontáneo, así como el inducido por interleucina 2, de las células tumorales de micosis fungoide (MF) con valores de IC50 de 75 μM y 20 μM, respectivamente. [3] Este compuesto inhibe potentemente el crecimiento de células T humanas mediado por IL-2 con una IC50 de 25 μM al bloquear las actividades de JAK3 y STAT5a/b. [4] Inhibe significativamente la activación constitutiva de Stat3 en células MOPC, MPC11 y S194, lo que lleva a una apoptosis dramática dependiente de la dosis. [6] Este químico (100 μM) inhibe la fosforilación de Akt, inhibe la activación del factor nuclear-κB y causa la activación de GSK-3β, lo que lleva a la reducción de c-Myc. Él (50 μM) puede inducir la apoptosis de células BaF3 que expresan los mutantes T315I y E255K de Bcr-Abl. [7] Este compuesto a 30 μM inhibe no solo la fosforilación de JAK2 de tipo salvaje inducida por Epo, sino también la fosforilación constitutiva del mutante JAK2 V617F. También inhibe potentemente el crecimiento celular independiente de citocinas inducido por el mutante JAK2 V617F en células BaF3. [8]

La administración de AG-490 reduce drásticamente el número de células CD45⁺ y HLA-DR⁺ del 48 % y 46 % en la médula ósea de ratones no tratados, así como del 38 % y 22 % en el bazo de ratones no tratados a niveles indetectables. [2] La administración in vivo de este compuesto causa apoptosis de las células tumorales de mieloma murino, pero no inhibe la activación de macrófagos mediada por IL-12 ni la producción de IFN-γ por los linfocitos. [6] De acuerdo con el bloqueo in vitro de la actividad del mutante JAK2 V617F, el tratamiento con este químico a 0,5 mg/día durante 10 días inhibe eficazmente la tumorigénesis y la invasión de células tumorales inducidas por el mutante JAK2 V617F en ratones nude. [8] La terapia combinada con este agente e IL-12 induce mayores efectos antitumorales que cualquiera de los agentes solos en un modelo de tumor de mieloma murino. [6]

• Autofosforilación de la quinasa in vitro

  AG-490 se disuelve en DMSO 10%-H₂O-etanol 45%. Los extractos de membrana crudos (0,125 μg/mL) se preactivan con EGF (20 nM) en tampón HEPES 50 mM, pH 7,6, y NaCl 125 mM, durante 15 minutos a 4 °C. La actividad de autofosforilación de la quinasa EGFR o ErbB2 se ensaya a 4 °C durante 30 segundos en placas de 96 pocillos en forma de V. Se añaden extractos de membrana (8 μL) a cada pocillo que contiene la mezcla de reacción (12 μL, HEPES 50 mM, pH 7,4, NaCl 125 mM, M₈Ac₂ 12 mM, MnCl₂ 2 mM, NaVO₃ 1 mM, ATP 1 μM y [γ-³²P]ATP 1 μCi, concentraciones finales) y concentraciones crecientes de este compuesto (4 μL). Después de la terminación por adición de tampón de muestra caliente, las muestras se corren en un minigel de electroforesis en gel de poliacrilamida SDS al 6 %, los geles se secan y se realiza una autorradiografía durante el período de tiempo de exposición lineal. Las bandas del receptor se escanean densitrométricamente y los resultados se analizan mediante el programa Ez-Fit. Para el análisis de la autofosforilación de JAK2, JAK2 se inmunoprecipita utilizando un anticuerpo anti-JAK2 a partir de lisados de células G2 pretratadas durante 16 horas con concentraciones crecientes de este químico (0-50 μM). Luego, los inmunocomplejos se inmunotransfieren con un anticuerpo anti-fosfotirosina. Se demuestra una inhibición dependiente de la dosis de la actividad quinasa in vitro mediante la evaluación de la autofosforilación de JAK2.

• Líneas celulares

  Pre-B ALL

• Concentraciones

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 50 μM

• Tiempo de incubación

  16 hours

• Método

  Cells are exposed to different concentrations of AG-490 for 16 hours. For the determination of cell proliferation, [³H]tymidine (1 μCi) is added 6 hours or more before the cultures are terminated. Cells are then collected and samples counted in a liquid scintillation counter.

• Modelos animales

  SCID mice intravenously injected with ALL cells

• Dosificaciones

  0.85 mg + 0.5 mg daily

• Administración

  Continuous pump infusion supplemented with daily intraperitoneal injections