740 Y-P (PDGFR 740Y-P)

El péptido PDGFR 740Y-P estimula una respuesta mitogénica en células musculares. La capacidad del péptido 740Y-P para estimular la mitogénesis es altamente específica y no una característica general de los péptidos de unión al dominio SH2 permeables a las células[2].

740Y-P es tan eficaz como un factor de crecimiento (FGF2) para promover la supervivencia de las células neuronales a través de la cascada de supervivencia PI 3-quinasa-Akt establecida. La estimulación de la supervivencia de las células neuronales por el péptido PDGFR740Y-P es dosis-dependiente y no requiere insulina[1].

740 Y-P disminuye el grado de niveles de ROS en los tejidos del hipocampo tratados con Aβ(25-32) y aumenta la extensión de la fosforilación de AKT y PI3K en un modelo de rata con enfermedad de Alzheimer.

• Líneas celulares

  NIH 3T3 cells

• Concentraciones

  50 μg/ml

• Tiempo de incubación

  2 h

• Método

  NIH 3T3 cells (2×10⁶) are incubated in suspension at 37°C in Ca2+ and Mn2+ free HBSS, 10% FCS containing either 50 μg/ml of 740Y-P peptide or an equal volume of PBS as a control. After 2h cells are centrifuged, washed and trypsinised to degrade non-internalised peptide. Cells are then resuspended in lysis buffer (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 10% Glycerol, 2% NP40, 0.25% deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM Vanadate, Protease inhibitors "complete" cocktail from Boehringer-Mannheim) for 1 h at 4°C. Lysates are clarified by centrifugation at 1.4×10⁴g for 5 min and the supernatants are incubated for 1h with streptavidin-agarose beads. Beads are subsequently washed three times in lysis buffer and finally boiled in SDS sample buffer and resolved by SDS-PAGE on a 12% gel, transferred to nitrocellulose and immunoblotted with the p85 monoclonal antibody.