3-Methyladenine (3-MA)

N.º de catálogoS2767 Lote:S276714

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Datos técnicos

Fórmula

C6H7N5
Peso molecular 149.15 Número CAS 5142-23-4
Solubilidad (25°C)* In vitro DMSO (calentado con baño de agua a 50 ºC) 16 mg/mL (107.27 mM)
Water (calentado con baño de agua a 50 ºC) 10 mg/mL (67.04 mM)
Ethanol 8 mg/mL (53.63 mM)
In vivo (Agregue los solventes al producto individualmente y en orden.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Validado por los laboratorios Selleck. Si necesita ajustes en esta formulación, póngase en contacto con nuestro equipo de ventas para pruebas personalizadas.

 0.500mg/ml (3.35mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 500 μL ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa ligeramente soluble o insoluble.
* Tenga en cuenta que Selleck prueba la solubilidad de todos los compuestos internamente, y la solubilidad real puede diferir ligeramente de los valores publicados. Esto es normal y se debe a ligeras variaciones entre lotes.
* Envío a temperatura ambiente (Las pruebas de estabilidad demuestran que este producto se puede enviar sin medidas de refrigeración.)

Preparación de soluciones madre

Actividad biológica

Descripción La 3-Methyladenine (3-MA) es un inhibidor selectivo de PI3K para Vps34 y PI3Kγ con IC50 de 25 μM y 60 μM en células HeLa. Bloquea la PI3K de clase I de forma consistente, mientras que la supresión de la PI3K de clase III es transitoria, y también inhibe la formación de autophagosome. Las soluciones son inestables y deben prepararse frescas.
Objetivos
Autophagy Vps34
(HeLa cells)		 PI3Kγ
(HeLa cells)
25 μM 60 μM
In vitro

La ligera preferencia por la prevención de Vps34 por la 3-Methyladenine (3-MA) probablemente surge de un anillo hidrofóbico específico de Vps34, que rodea el grupo 3-metilo de este compuesto. Se ha informado que causa la muerte de células cancerosas tanto en condiciones normales como de inanición, y también podría suprimir la migración e invasión celular independientemente de su capacidad para inhibir la Autophagy, lo que implica que posee funciones distintas de la supresión de la Autophagy. Este compuesto provoca la muerte celular dependiente de caspasa que es independiente de la inhibición de la Autophagy. El tratamiento con 5 mM de este compuesto reduce el porcentaje de células HeLa privadas de glucosa que muestran puntos GFP-LC3 al 23%. Los niveles de LC3-I aumentan y los niveles de LC3-II disminuyen entre 12 y 48 horas en células tratadas con 3-MA. La conversión de LC3-I a LC3-II es suprimida por el compuesto. El tratamiento de células HeLa con 2,5 mM o 5 mM durante un día no afecta la viabilidad celular, mientras que el tratamiento con 10 mM durante un día causa una disminución del 25,0% en la viabilidad celular. El tratamiento de células con 2,5, 5 o 10 mM durante dos días causa una disminución del 11,5%, 38,0% y 79,4% en la viabilidad, respectivamente. Disminuye la viabilidad celular de forma dependiente del tiempo y la dosis, y acorta significativamente la duración de la detención de la prometafase inducida por nocodazol. La supresión de la Autophagy por 3-MA inhibe la muerte celular inducida por SU11274. El tratamiento prolongado con este compuesto (hasta 9 horas) induce una conversión significativa de LC3 I a II en MEF de tipo salvaje. El tratamiento prolongado con 3-MA, pero no con wortmannin, aumenta notablemente la puntuación/agregación de GFP-LC3. Su conversión de LC3 inducida y la liberación de GFP libre son dependientes de ATG7. El tratamiento con este compuesto conduce a un aumento evidente del nivel de proteína p62. El compuesto aumenta el nivel de p62 incluso en MEF Atg5-/-- así como en células con deleción de ATG5 mediada por DOX. Inhibe la PI3K de clase I y clase III en diferentes patrones temporales. Su conversión de LC3 I a LC3 II inducida está dramáticamente comprometida en células Tsc2-/-- en comparación con células de tipo salvaje. Este compuesto interrumpe la función anti-autofágica del complejo mTOR 1.

In vivo

La 3-Methyladenine (3-MA) bloquea la Autophagy a través de su efecto sobre la fosfatidilinositol 3-cinasa (PI3K) de clase III. El tratamiento con este compuesto no altera el grado de hemorragia en comparación con el grupo de hemorragia subaracnoidea (HSA). Su pretratamiento agrava significativamente los síntomas neurológicos en comparación con el grupo HSA + vehículo. La Autophagy disminuye cuando se aplica. Por el contrario, la caspasa-3 escindida está marcadamente regulada al alza en el grupo HSA + 3-MA. En línea con la regulación al alza de la expresión de la caspasa-3 escindida, el número de células TUNEL-positivas en el córtex derecho aumenta significativamente en el grupo HSA + 3-MA en comparación con el grupo HSA + vehículo.

Protocolo (de referencia)

Ensayo de quinasa:

[4]
  • Ensayo de degradación de proteínas

    Las células HeLa se radiomarcan durante 24 horas con 0,05 mCi/mL de l-[U- 14C]valina. Al final del período de marcado, las células se enjuagan tres veces con PBS. Las células se incuban durante los tiempos designados en medio completo o EBSS con o sin la presencia de 10 mM de 3-Methyladenine (3-MA).
Ensayo celular:

[2]
  • Líneas celulares

    HeLa cell line

  • Concentraciones

    1-10 mM

  • Tiempo de incubación

    24, 48 or 72 hours

  • Método

    After treatment with 3-Methyladenine (3-MA), cell (such as HeLa cell) viability is determined by a trypan blue exclusion assay. Briefly, both adherent and floating cells are collected and suspended in phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) at a final density of 1-2 × 106/mL. An equal volume of 0.4% trypan blue solution (w/v, in PBS) is added to the cell suspension and mixed thoroughly. After incubation at room temperature for 3 min, cell counting is performed using a hemacytometer.
Estudio en animales:

[5]
  • Modelos animales

    Adult male Sprague–Dawley rats weighing 300-350 g

  • Dosificaciones

    400 nM

  • Administración

    Intracerebral ventricular

Referencias

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20574157/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22545128/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22466960/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20123989/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22521819/

Validación de productos por parte del cliente

granulosa cells (GCs) with 24 h of melatonin (10 μM) treatment were rinsed in PBS, and then exposed to H2O2 (200 μM) for 2 h. The autophagy inhibitor 3-MA (10 mM), or the apoptosis inhibitor Z-VAD-FMK (50 μM) were added 1 h prior to H2O2 incubation. Cell viability was determined using the CCK-8 assay. Data represent mean ± S.E; n = 3 in each group. *P < 0.05 (**P < 0.01) vs. vehicle group at 0 h. # Represents P < 0.05 (## Represents P < 0.01) vs. H2O2-only-treated cells. & Represents P > 0.05 vs. H2O2-only-treated cells. N, not significant, P > 0.05. δ Represents P < 0.05 (δδ Represents P < 0.01) vs. Z-VAD-FMK-treated cells.

Datos de [ , , Redox Biol, 2018, 18:138-157 ]

MDC-labeled vacuoles were induced by AZD2014 and inhibited by autophagy inhibitor (3-MA). SMMC-7721 cells were treated with AZD2014 or rapamycin at concentrations of 100 and 600 nM, respectively, for 48 hours in the presence or absence of 3-MA, and then stained with MDC. Cells were immediately observed under a confocal microscope. Cells in the control group were treated with DMSO. bars, 20 μm.

Datos de [ , , Am J Cancer Res, 2015, 5(1): 125-139 ]

Cells were treated with DMSO, TDCIPP (100 μM) only, or pretreated with 3-MA before treatment with TDCIPP (100 μM). LC3 conversion and beclin-1 and p62 expression were assessed by western blotting at 24 h

Datos de [ , , Food Chem Toxicol, 2017, 100:183-196 ]

PC-9/ER cells were treated with CX-4945 (5 mM) for 48 h in the presence or absence of 3-MA (2 mM) and Atg7 siRNA (100 nM). Cleavage of PARP-1 and caspase-3 was shown by Western blot analysis. CT: without CX-4945; CX: CX-4945; CX+G: CX-4945 + gefitinib; CX+E: CX-4945 + erlotinib.

Datos de [ , , PLoS One, 2014, 9(12): e114000 ]

Sellecks 3-Methyladenine (3-MA) Ha sido citado por 978 Publicaciones

Cooperative nutrient scavenging is an evolutionary advantage in cancer [ Nature, 2025, 10.1038/s41586-025-08588-w] PubMed: 39972131
Host glutathione is required for Rickettsia parkeri cell division and intracellular survival [ Nat Commun, 2025, 16(1):5547] PubMed: 40593553
Viruses hijack FPN1 to disrupt iron withholding and suppress host defense [ Nat Commun, 2025, 16(1):5912] PubMed: 40595467
RNF167 mediates atypical ubiquitylation and degradation of RLRs via two distinct proteolytic pathways [ Nat Commun, 2025, 16(1):1920] PubMed: 39994288
Unfolded protein response kinase PERK supports survival and metastasis of circulating tumor cell clusters via SAM synthesis and H3K4me3-dependent PDGFB signaling [ Cancer Commun (Lond), 2025, 45(12):1706-1733.] PubMed: 41212905
Extracellular LCN2 Binding to 24p3R in Astrocytes Impedes α-Synuclein Endocytosis in Parkinson's Disease [ Adv Sci (Weinh), 2025, 12(39):e01694] PubMed: 40686313
USP10 Inhibits Ferroptosis via Deubiquinating POLR2A in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma [ Adv Sci (Weinh), 2025, 12(36):e12271] PubMed: 40605431
Disrupting AGR2/IGF1 paracrine and reciprocal signaling for pancreatic cancer therapy [ Cell Rep Med, 2025, 6(2):101927] PubMed: 39914384
TBK1 is a signaling hub in coordinating stress-adaptive mechanisms in head and neck cancer progression [ Autophagy, 2025, 1-23.] PubMed: 40114316
H3K36me2 methyltransferase NSD2/WHSC1 promotes triple-negative breast cancer metastasis via activation of ULK1-dependent autophagy [ Autophagy, 2025, 21(8):1824-1842] PubMed: 40097917

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