3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride

3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) produce un aumento significativo en la acumulación de células en la fase G0/G1 (58,5%) con una disminución concomitante en el número de células en la fase S (35,2%) y en las fases G2/M (6,3%) del ciclo celular de las células de leucemia mieloide aguda humana OCI-AML3. 3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) induce apoptosis en OCI-AML3 (~50%) y células HL-60 (~50%), y una reducción de más del 90% en el crecimiento de colonias a las 48 h. 3-Deazaneplanocin A disminuye los niveles de EZH2 e inhibe la trimetilación de la lisina 27 en la histona H3 en las células HL-60 y OCI-AML3 y en las células primarias de LMA. El tratamiento con 3-Deazaneplanocin A induce p16, p21, p27 y FBXO32 mientras disminuye los niveles de ciclina E y HOXA9. 500 nM de 3-Deazaneplanocin A induce la diferenciación de HL-60 a células CD11b⁺ en casi 3 veces a las 48 h. [2] 3-Deazaneplanocin A tiene una excelente actividad contra varios tipos virales. 3-Deazaneplanocin A es activo contra la estomatitis vesicular en células L929, parainfluenza 3 en H.Ep-2, virus de la viruela y fiebre amarilla en células vero con IC50 de 0,2, 3,6, 2,1 y 2,9 μg/mL, respectivamente. [3] 3-Deazaneplanocin A muestra un efecto leishmanistático fuerte y uniforme sobre cepas americanas de Leishmania (L mexicana y L brasiliensis) en el estudio con una ID50 promedio de 96 ng/mL, pero no muestra inhibición contra varias cepas de T. cruzi y T. rangeli probadas con concentraciones de hasta 10 μg/mL. A una dosis de 200 ng/mL, 3-Deazaneplanocin A inhibe la incorporación de S-adenosil-L-3H-metilmetionina y 3-timidina por promastigotes después de cuatro días. A una dosis de 100 ng/mL, 3-Deazaneplanocin A elimina aproximadamente el 56% de L mexicana y L brasiliensis de los macrófagos humanos infectados. [4]

3-Deazaneplanocin A muestra actividad antileucémica in vivo. 3-Deazaneplanocin A a dosis de 8 mg/kg muestra actividad antiviral in vivo contra el virus vaccinia en un ensayo de viruela de la cola de ratón con una mediana de 0,0 viruelas/cola (84% de protección). [3] 3-Deazaneplanocin A a dosis que oscilan entre 0,5 y 1,5 mg/kg/día, redujo significativamente el desarrollo de la infección cutánea por leishmania producida en ratones BALB/c endogámicos por inoculación de L. b. guyanensis. [4] 3-Deazaneplanocin A induce una producción masivamente aumentada de interferón-α en ratones infectados con el virus del Ébola. 3-Deazaneplanocin A (inyección s.c. de 2 mg/kg postinfección) previene la muerte en ratones infectados con 1000 pfu (30 000 DL50) de EBO-Z adaptado a ratón. El tratamiento con 3-Deazaneplanocin A el día 1 reduce los títulos virales séricos medios el día 2 en 100 veces y el día 3 en 100 000 veces, en comparación con los controles de placebo, y resulta en un nivel sérico medio de IFN-α de 1420 pg/mL el día 2 y 1830 pg/mL el día 3. [5]

• Ensayo de actividad de S-adenosilhomocisteína hidrolasa

  La mezcla de reacción utilizada para el ensayo de AdoHcyase contiene, en un volumen final de 0,5 mL, 50 mM de fosfato de potasio (pH 7,6), 5 mM de ditiotreitol, 1 mM de EDTA, 10 % de glicerol y la enzima. Se utiliza L-[8- ^14C]AdoHcy como sustrato y se incluyen 5 unidades de adenosina desaminasa intestinal de ternera. La reacción se detiene con la adición de 100 μL de ácido fórmico 5 M, y la mezcla de reacción se vierte luego en una columna (0,8×2,5 cm) de SP-Sephadex C-25, previamente equilibrada en ácido fórmico 0,1 M. Cada tubo de ensayo se enjuaga con 0,5 mL de ácido fórmico 0,1 M. La [¹⁴C]Inosina formada se eluye de la columna con 3,5 mL de ácido fórmico 0,1 M en un vial de centelleo. La radioactividad se determina después de la adición de 10 mL de líquido de centelleo. La cantidad de enzima utilizada es de aproximadamente 105 pU, o 75 ng de la enzima purificada. Una unidad es la cantidad de enzima necesaria para formar 1 pmol de producto en 1 min a 37 ℃.

• Líneas celulares

  Human acute myeloid leukemia HL-60

• Concentraciones

  ~1 μM

• Tiempo de incubación

  2 days

• Método

  Cells are treated with the indicated concentrations of 3-Deazaneplanocin A for 48 hours. After the designated treatments, cells are harvested and washed twice with PBS, and approximately 500 cells are plated in complete Methocult and cultured for 7 to 10 days at 37 ℃ in a 5% CO₂ environment. Cells are dyed with crystal violet, and relative colony density is determined by solubilizing the crystal violet dye in 10% acetic acid followed by measurement of absorbance at 450 nm.

• Modelos animales

  Human acute myeloid leukemia xenografts HL-60

• Dosificaciones

  1 mg/kg

• Administración

  initiated on day 7 and administered twice per week (Tuesday-Thursday) intraperitoneally for 2 weeks