2-NBDG

1.1 Preparación de la solución madre
Disolver 1 mg de 2-NBDG en 2,92 mL de DDH2O para obtener 1 mM de este compuesto.
Nota: Se recomienda almacenar la solución madre a -20 ℃ o -80 ℃ protegida de la luz y evitar ciclos repetitivos de congelación-descongelación.
1.2 Preparación de la solución de trabajo de 2-NBDG.
Diluir la solución madre en medio de cultivo celular sin suero o PBS para obtener 10-200 μM de esta solución de trabajo química.
Nota: Ajuste la concentración de la solución de trabajo de este reactivo según la situación real.
Tinción celular
2.1 Para células en suspensión: Centrifugar a 1.000 g a 4℃ durante 3-5 minutos y luego desechar el sobrenadante. Lavar dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.
Para células adherentes: Desechar el medio de cultivo celular y añadir tripsina para disociar las células y obtener una suspensión unicelular. Centrifugar a 1000 g a 4℃ durante 3-5 minutos y luego desechar el sobrenadante. Lavar dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.
2.2 Añadir 1 mL de esta solución de trabajo compuesta y luego incubar a temperatura ambiente durante 5-60 minutos.
2.3 Centrifugar a 400 g a 4℃ durante 3-4 minutos y luego desechar el sobrenadante.
2.4 Lavar dos veces con PBS, 5 minutos cada vez.
2.5 Resuspender las células con medio de cultivo celular sin suero o PBS. Si se prueba la viabilidad, se registró la densidad óptica (D.O.) a 540/570 nm. La viabilidad celular se calculó como una relación de control y se graficó frente a la concentración logarítmica del fármaco para calcular la IC50.

La intensidad de fluorescencia de 2-NBDG después de 30 minutos de aplicación tópica fue 6 veces y 4 veces mayor en el CCEB y la DEO, respectivamente, en comparación con la mucosa normal. El análisis de la curva ROC mostró una sensibilidad del 83 % y una especificidad del 73 % para la detección de neoplasia frente a benigna (normal e inflamación). Una disminución temporal más rápida de la fluorescencia en la neoplasia indicó una mayor captación y tasa metabólica de glucosa que en la mucosa normal. La administración mucosa de este compuesto mediante aplicación tópica a la superficie oral in vivo es factible y delimita la neoplasia de la mucosa normal, proporcionando imágenes moleculares no invasivas in vivo del metabolismo de la glucosa desregulado.[2]

• Líneas celulares

  Primary cortical astrocytes

• Concentraciones

  25 μM to 200 μM

• Tiempo de incubación

  1 h

• Método

  Nine culture plates of astrocytes are used for each uptake experiment. After medium is removed and plates are rinsed in wash buffer, cells are incubated at 37 °C in buffer containing 25–200 μM 2-NBDG. After 1 h, buffers are replaced by fresh incubation buffer with 2 mM glucose and incubation is continued for 5 min. The cells are washed twice with prechilled phosphate-buffered saline and are incubated at room temperature in 0.1 mL cell lysis buffer for 10 min.

• Modelos animales

  4-week old male Golden Syrian Hamsters

• Dosificaciones

  1 mg/ml (1 ml)

• Administración

  Oral gavage