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Y-27632 Dihydrochloride ROCK Inhibidor

Cat. No.S1049

Y-27632 2HCl es un inhibidor selectivo de ROCK1 y ROCK2 con un Ki de 140 nM y 300nM en un ensayo sin células, exhibiendo una selectividad >200 veces superior a otras quinasas, incluyendo PKC, proteína quinasa dependiente de cAMP, MLCK y PAK.
Y-27632 Dihydrochloride ROCK Inhibidor Chemical Structure

Estructura química

Peso molecular: 320.26

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Control de calidad (Quality Control)

Lote: Pureza: 99.89%
99.89

Productos que se suelen utilizar junto con Y-27632 Dihydrochloride

SB202190

This compound and SB202190, along with other small molecule inhibitors, generate inducible mesenchymal stromal/stem cells (MSCs)-like cells (iMSCs) from human primary dermal fibroblasts.

SB431542

This compound and SB431542 combination reverses the mesenchymal actin cytoskeleton stress fibers induced by TGF-β1 in TGF-β1 knockout mice cells (mTEC-KO).

CHIR-99021 (Laduviglusib)

It and CHIR99021 collectively reduce the expression of adipogenic genes in both wild-type (WT) and PKP2mut cardiac myocytes (CMs).

MG132

This compound reduces P-IκBα polyubiquitination caused by TNFα with MG132 pre-treatment in MYLA cells.

Z-VAD-FMK

It and Z-VAD-FMK block membrane blebbing and nucleus condensation induced by H2O2 in PC12 cells.

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Líneas celulares Tipo de ensayo Concentración Tiempo de incubación Formulación Descripción de la actividad PMID
Salivary gland stem cells Function Assay 10 µM 7 d Reduces SGSC senescence 25804560
HT22 Cytotoxic Assay 10 µM 13 h Protects against glutamate-induced neuronal death 22810835
Swiss3T3 Colony-forming Assay 10 µM 13 d Increases prostate cell colony-forming activity 21464902
TSGH 8301 Migration Assay 20 µM 1 h Increases cell migration 19896475
Cynomolgus monkey embryonic stem cells Cytotoxic Assay 20 µM 24 h Promotes cyES cell survival 18940855
PC 12 Function Assay 10 μM 24 h Attenuates catecholamine biosynthesis 16219424
C2C12 Function Assay 10 μM 6 h Prevents the serine phosphorylation of IRS-1 induced by insulin and/or TNF-α 16267124
Pancreatic acinar cells Function Assay 10 μM 70 min Potentiates CCK-stimulated pancreatic enzyme secretion 12745080
Rat hepatic stellate cells Function Assay 30 μM 48 h Diminishes the phosphorylation of Erk2, and decreases new DNA synthesis 10845663
LNCaP Growth Inhibition Assay 25 μM 17 h Does not inhibit cell growth 10720471
PC3 Growth Inhibition Assay 25 μM 17 h Does not inhibit cell growth 10720471
PC3 Migration Assay 25 μM 1 h Inhibits the BMFB-CM and the EGF-stimulated migration 10720471
PC3 Function Assay 25 μM 1 h Induces morphological changes 10720471
Rat Vascular Smooth Muscle Cells Function Assay 10 μM 2 h Inhibits angiotensin II-induced hypertrophy 10642317
Stellate Cell Function Assay 25 μM 15 min Inhibits formation of F-actin stress fibers and phosphorylation of myosin light chain 10600496
Neonatal rat ventricular myocytes Function Assay 10 μM 48 h Inhibits ET-1-induced increases in protein synthesis, cell size and myofibrillar organization 10386613
LS174T Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Moderately inhibits cell growth 10021386
HCT116 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
HCT15 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
SW620 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-2 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-1 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
NIH3T3 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-4 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Src-1 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Ras-4 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
Ras-2 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
mNET1-e Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
mNET1-d Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
Dbl-e Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Moderately inhibits cell growth 10021386
Dbl-d Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Strongly inhibits cell growth 10021386
NIH3T3 Growth Inhibition Assay 10 μM 18 d Does not inhibit cell growth 10021386
Mesothelial cells from rat mesentery Invasive Assay 30 μM 20 h Blocks invasive activity 9930872
CCL39 Function Assay 30 μM 30 min Completely abolishes activation of Na-H exchanger NHE1 by integrins 9693382
HeLa Function Assay 10 μM 30 min Inhibits the formation of stress fibers and the assembly of vinculin-containing focal adhesions 9668072
N1E-115 Function Assay 10 μM 2 h DMSO Inhibits the assembly of microtubules and intermediate filaments to form extended processes 9647654
Swiss 3T3 cells Function Assay 10 μM 2 h DMSO Inhibits the assembly of microtubules and intermediate filaments to form extended processes 9647654
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Información química, almacenamiento y estabilidad (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecular 320.26 Fórmula

C14H21N3O.2HCl

 Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)
Nº CAS 129830-38-2 Descargar SDF Almacenamiento de soluciones madre

Sinónimos N/A Smiles CC(C1CCC(CC1)C(=O)NC2=CC=NC=C2)N.Cl.Cl

Solubilidad (Solubility)

In vitro
Lote:

DMSO : 64 mg/mL (199.83 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Water : 64 mg/mL

Ethanol : 4 mg/mL

Calculadora de Molaridad

Masa Concentración Volumen Peso molecular
Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo
Lote:

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

mg/kg g μL

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH2O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
ROCK1 (p160ROCK)
(Cell-free assay)
140 nM(Ki)
ROCK2
(Cell-free assay)
300 nM(Ki)
In vitro

Y-27632 2HCl inhibe ROCK-II mientras que muestra poca actividad contra PKC, proteína quinasa dependiente de cAMP y quinasa de la cadena ligera de miosina (MLCK) con Ki de 26 μM, 25 μM y > 250 μM, respectivamente, así como PKA activada por otro miembro de la GTPasa de la familia Rho, Cdc42. Este compuesto inhibe la contracción del músculo liso inducida por varios agonistas, incluyendo fenilefrina, histamina, acetilcolina, serotonina, endotelina y tromboxano con una IC50 de 0,3-1 μM, inhibiendo selectivamente la sensibilización a Ca2+. Suprime la formación de fibras de estrés mediada por Rho y p160ROCK en células cultivadas.

Este tratamiento químico bloquea tanto la activación de la actomiosina mediada por Rho como la actividad invasiva estimulada por LPA de las células MM1 de manera dependiente de la concentración.

Este tratamiento con el compuesto no solo es suficiente para iniciar la formación de procesos axonales exuberantes, sino que también facilita la maduración axonal durante las primeras etapas de la axonogénesis, respetando en gran medida la elongación axonal.

En células madre embrionarias humanas (hES), este tratamiento químico a 10 μM disminuye notablemente la apoptosis inducida por la disociación incluso en cultivo en suspensión sin suero (SFEB), aumenta la eficiencia de clonación (de ~1% a ~27%), facilita la subclonación después de la transferencia de genes y permite que las células hES cultivadas en SFEB sobrevivan y se diferencien en progenitores corticales y telencefálicos basales Bf1+.

Ensayo de quinasa
Reacciones de fosforilación
La p160ROCK se expresa en células COS como proteínas de longitud completa etiquetadas, y se inmunoprecipita mediante el uso de anticuerpos anti-etiqueta. La p160ROCK (30 ng) se incuba con 40 μM [γ-32P]ATP (3,3 Ci/mmol) y con 3 μg de histona (HF2A), caseína desfosforilada o MBP en presencia de varias concentraciones de este compuesto a 30 °C en un volumen total de 31 μL. Se toma una alícuota de 7 μL a los 0, 5, 10 y 20 minutos, se mezcla con un volumen igual de tampón de muestra 2 × Laemmli y se aplica a SDS-PAGE. El gel se tiñe con azul de Coomassie, se seca y se somete a análisis mediante un analizador de bioimágenes BAS2000. Se obtiene la concentración de este químico requerida para inhibir la actividad de p160ROCK en un 50% (valor IC50). El valor de Ki se calcula de acuerdo con la ecuación, Ki = IC50/(1 + S/Km), donde S y Km representan las concentraciones y el valor de Km para ATP.
In vivo

La administración oral de Y-27632 2HCl a 30 mg/kg disminuye significativamente la presión arterial de manera dosis-dependiente en ratas espontáneamente hipertensas, ratas hipertensas renales, así como ratas hipertensas por acetato de desoxicorticosterona (DOCA)-sal.

Cuando este compuesto se administra continuamente a una tasa de 0,55 μL por hora mediante bombas implantadas durante 11 días, la invasión de células tumorales (células MM1 que expresan Val14-RhoA en ratas) se retrasa significativamente.

Al inhibir ROCK, este tratamiento químico atenúa la angiogénesis inducida por hipoxia y la remodelación vascular en la circulación pulmonar. El pretratamiento con este compuesto tiene un efecto protector contra la formación de tumores en ratones albinos con carcinoma ascítico de Ehrlich.

Referencias
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17529971/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15961717/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10779382/
  • [7] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24905316/

Aplicaciones (Applications)

Métodos Biomarcadores Imágenes PMID
Western Blot p-LIMK1(Thr508) p-LIMK2(Thr505) p-Cofilin(Ser3) CDK2 KRT7 ROCK2 E-cadherin p-MLC2(Ser19)
S1049-WB1
24704720
Transwell migration assay cell migration inhibition
S1049-histogram1
27694793
Immunofluorescence Neurotoxicity Assay E-cadherin beta-catenin Phalloidin
S1049-IF1
21362567
Growth inhibition assay cell proliferation
S1049-histogram2
24523903
ELISA caspase-9
S1049-ELISA1
30320378

Preguntas frecuentes (Frequently Asked Questions)

Pregunta 1:
Is there any data about the Amax (maximum attraction luminosity) and extinction coefficient of it?

Respuesta:
The wavelength used to test its HPLC is 260nm, while the extinction coefficient is unknown.

Pregunta 2:
Could it be used in cell culture? Do you have any reference for this application?

Respuesta:
Yes. It can be used in cell culture certainly. Here is the reference website: http://molpharm.aspetjournals.org/content/57/5/976.full.