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GSK-J4 Hydrochloride H3K27 Histone Demethylase Inhibitor

Cat. No.: S7070

GSK J4 HCl is a cell permeable prodrug of GSK J1, which is the first selective inhibitor of the H3K27 histone demethylase JMJD3 and UTX with IC50 of 60 nM in a cell-free assay and inactive against a panel of demethylases of the JMJ family.
GSK-J4 Hydrochloride Histone Demethylase inhibitor Chemical Structure

Estructura química

Peso molecular: 453.96

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Control de calidad (Quality Control)

Lote: Pureza: 99.48%
99.48

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Líneas celulares Tipo de ensayo Concentración Tiempo de incubación Formulación Descripción de la actividad PMID
CUTLL1 Growth inhibitory assay 2 μM DMSO affects cell growth 25132549
CUTLL1 Apoptosis assay 2 μM DMSO induces apoptosis 25132549
CUTLL1 Function assay 2 μM DMSO induces cell cycle arrest 25132549
CUTLL1 Kinase assay 6 μM DMSO leads to increased H3K27me3 25132549
SF7761 Kinase assay 6 μM DMSO increases K27 methylation 25401693
SF8628 Kinase assay 6 μM DMSO increases K28 methylation 25401693
H3.3 Kinase assay 6 μM DMSO increases K29 methylation 25401693
SF9012 Kinase assay 6 μM DMSO increases K30 methylation 25401693
SF9402 Kinase assay 6 μM DMSO increases K31 methylation 25401693
SF9427 Kinase assay 6 μM DMSO increases K32 methylation 25401693
human astrocytes Kinase assay 6 μM DMSO increases K33 methylation 25401693
SF7761 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K27M glioma cell growth 25401693
SF8628 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K28M glioma cell growth 25401693
H3.3 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K29M glioma cell growth 25401693
SF9012 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K30M glioma cell growth 25401693
SF9402 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K31M glioma cell growth 25401693
SF9427 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K32M glioma cell growth 25401693
human astrocytes Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K33M glioma cell growth 25401693
TG neurons Function assay 50 μM DMSO inhibits HSV-1 reactivation from sensory neurons 25552720
Th17 Function assay 80 nM DMSO inhibits cell differentiation 25840993
β-cells Function assay 20 μM DMSO blunts IFNγ, Il-1β, and TNFα-induced chemokine gene expression 26505193
β-cells Function assay 20 μM DMSO induces β-cell dysfunction 26505193
ESCs Function assay 1.8 µM DMSO induces DNA damage along with activation of the DNA damage response 26759175
Raw 264.7 Function assay 0.8192 µM DMSO inhibits TNF-α production 26776360
MCF7 Function assay 1 to 10 uM 30 hrs Inhibition of KDM5A in human MCF7 cells assessed as effect on H3K4me3 methylation levels at 1 to 10 uM after 30 hrs by Western blot analysis 30392349
MCF7 Function assay 1 to 10 uM 30 hrs Inhibition of KDM5A in human MCF7 cells assessed as effect on H3K27me3 methylation levels at 1 to 10 uM after 30 hrs by Western blot analysis 30392349
RAW264.7 0.82 uM 24 hrs Inhibition of LPS-induced TNFalpha production in mouse RAW264.7 cells 0.82 uM after 24 hrs by ELISA 26776360
RAW264.7 24 hrs Inhibition of LPS-induced TNFalpha production in mouse RAW264.7 cells after 24 hrs by ELISA 26776360
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Información química, almacenamiento y estabilidad (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecular 453.96 Fórmula

C24H27N5O2.HCl

 Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)
Nº CAS 1797983-09-5 Descargar SDF Almacenamiento de soluciones madre

Solubilidad (Solubility)

In vitro
Lote:

DMSO : 91 mg/mL (200.45 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Ethanol : 91 mg/mL

Water : 10 mg/mL

Calculadora de Molaridad

Masa Concentración Volumen Peso molecular
Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo
Lote:

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

mg/kg g μL

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH2O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
JMJD3
(Cell-free assay)
60 nM
In vitro

GSK J4 HCl es un derivado de éster etílico del inhibidor selectivo de histona desmetilasa JMJD3 GSK-J1 con un valor de IC50 superior a 50 μM in vitro. Este compuesto se utiliza para investigar las consecuencias de la desmetilación de H3K27me3. En macrófagos primarios humanos, esta sustancia química inhibe la producción de citoquinas inducida por lipopolisacárido, incluido el factor de necrosis tumoral (TNF) proinflamatorio. Además, previene la pérdida de H3K27me3 inducida por lipopolisacárido asociada con los sitios de inicio de la transcripción del TNF y bloquea el reclutamiento de la ARN polimerasa II.

Ensayo de quinasa
Histone Demethylase AlphaScreen
La inhibición de las histona demetilasas se evalúa utilizando el ensayo AlphaScreen de histona demetilasa (Amplified Luminescence Proximity Homogenous Assay). Este ensayo utiliza un péptido sustrato biotinilado y se basa en la detección de la marca metilo del producto mediante un anticuerpo específico acoplado a perlas aceptoras de proteína A y una perla donante de Estreptavidina para capturar el péptido. En resumen, las enzimas demetilasas recombinantes se incuban en presencia de Fe2+ en forma de sulfato ferroso amónico (FAS), α-cetoglutarato (KG) y péptido sustrato biotinilado. Se incluye ácido L-ascórbico para proporcionar un ambiente reductor y prevenir la oxidación de Fe2+. Después de la incubación con el péptido sustrato, la presencia del producto se detecta mediante la tecnología AlphaScreen. Los ensayos AlphaScreen de demetilasa se realizan en formato de placa de 384 pocillos utilizando proxiplacas blancas. Todos los pasos se llevan a cabo en tampón de ensayo (50 mM HEPES pH 7.5, 0.1% (p/v) BSA y 0.01 % (v/v) Tween-20). El FAS se disuelve fresco cada día en 20 mM HCl a una concentración de 400 mM y se diluye a 1.0 mM en agua desionizada. Todos los demás componentes se disuelven frescos cada día en agua desionizada. Para las determinaciones de IC50, se transfieren 5 μL de tampón de ensayo que contiene la enzima demetilasa a los pocillos de una proxiplaca de 384 pocillos. Se transfieren titulaciones de este compuesto (0.1 μL) a cada pocillo y se permite que las enzimas preincuben durante 15 minutos con esta sustancia química (la concentración final de DMSO es del 1%). La reacción enzimática se inicia añadiendo 5 μL de una mezcla de sustratos que consiste en α-KG, FAS, ácido L-ascórbico y péptido sustrato biotinilado, y la reacción se incuba durante el tiempo indicado a temperatura ambiente. La reacción enzimática se detiene después del tiempo indicado añadiendo 5 μL de EDTA (concentración final de 7.5 mM en tampón de ensayo). Las perlas donantes de Estreptavidina (0.08 mg/ml) y las perlas aceptoras conjugadas con Proteína A (0.08 mg/ml) se preincuban durante 1 hora con un anticuerpo para la marca metilo del producto y la presencia del producto biotina-H3 se detecta añadiendo 5 μL de las perlas AlphaScreen preincubadas (concentraciones finales de 0.02 mg/ml con respecto a las perlas aceptoras y donantes). La detección se permite proceder durante 1 hora a temperatura ambiente y las placas de ensayo se leen en un lector de placas BMG Labtech Pherastar FS. Los datos se normalizan al control sin enzima y la IC50 se determina a partir del ajuste de la curva de regresión no lineal utilizando GraphPad Prism 5.
In vivo

El clorhidrato de GSK-J4 es un potente inhibidor dual de las H3K27me3/me2-demetilasas JMJD3/KDM6B y UTX/KDM6A. Inhibe la producción de TNF-α inducida por LPS en macrófagos primarios humanos. Este compuesto es un profármaco permeable a las células de GSK-J1.
Referencias