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Pelitinib (EKB-569) EGFR Inhibidor

Cat. No.: S1392

Pelitinib (EKB-569) es un potente inhibidor irreversible de EGFR con una IC50 de 38,5 nM. Este compuesto también inhibe ligeramente Src, MEK/ERK y ErbB2 con IC50s de 282 nM, 800 nM y 1255 nM, respectivamente. Fase 2.
Pelitinib (EKB-569) EGFR Inhibidor Chemical Structure

Estructura química

Peso molecular: 467.92

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Control de calidad (Quality Control)

Lote: Pureza: 99.49%
99.49

Cultivo celular, tratamiento y concentración de trabajo
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Líneas celulares Tipo de ensayo Concentración Tiempo de incubación Formulación Descripción de la actividad PMID
A431 Function assay Inhibition of EGFR autophosphorylation in human A431 cells, IC50=0.00802μM. 20797871
Sf9 Function assay 10 mins Inhibition of recombinant human His6-tagged EGFR cytoplasmic domain (645 to 1186 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in autophosphorylation preincubated for 10 mins followed by ATP-MgCl2 addition and measured, IC50=0.0385μM. 30600149
A431 Function assay 90 mins Inhibition of EGFR in human A431 cells assessed as reduction in EGF-stimulated EGFR autophosphorylation preincuabted for 90 mins followed by EGF-stimulation by sandwich-ELISA, IC50=0.039μM. 30973735
DiFi Function assay 2 hrs Inhibition autophosphorylation of EGFR in human DiFi cells after 2 hrs by ELISA, IC50=0.07943μM. 17689836
UCH1 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH1 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=0.09μM. 30973735
UCH2 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH2 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=1.6μM. 30973735
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Información química, almacenamiento y estabilidad (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecular 467.92 Fórmula

C24H23ClFN5O2

 Almacenamiento (Desde la fecha de recepción)
Nº CAS 257933-82-7 Descargar SDF Almacenamiento de soluciones madre

Sinónimos N/A Smiles CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CC(=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)C#N)NC(=O)C=CCN(C)C

Solubilidad (Solubility)

In vitro
Lote:

DMSO : 13 mg/mL (27.78 mM)
(El DMSO contaminado con humedad puede reducir la solubilidad. Usar DMSO fresco y anhidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calculadora de Molaridad

Masa Concentración Volumen Peso molecular
Calculadora de Dilución Calculadora de Peso Molecular

In vivo
Lote:

Calculadora de formulación in vivo (Solución clara)

Paso 1: Introduzca la información a continuación (Recomendado: Un animal adicional para tener en cuenta la pérdida durante el experimento)

mg/kg g μL

Paso 2: Introduzca la formulación in vivo (Esto es solo la calculadora, no la formulación. Por favor, contáctenos primero si no hay una formulación in vivo en la sección de Solubilidad.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Resultados del cálculo:

Concentración de trabajo: mg/ml;

Método para preparar el líquido maestro de DMSO: mg fármaco predissuelto en μL DMSO ( Concentración del líquido maestro mg/mL, Por favor, contáctenos primero si la concentración excede la solubilidad del DMSO del lote del fármaco. )

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadirμL PEG300, mezclar y clarificar, luego añadirμL Tween 80, mezclar y clarificar, luego añadir μL ddH2O, mezclar y clarificar.

Método para preparar la formulación in vivo: Tomar μL DMSO líquido maestro, luego añadir μL Aceite de maíz, mezclar y clarificar.

Nota: 1. Por favor, asegúrese de que el líquido esté claro antes de añadir el siguiente disolvente.
2. Asegúrese de añadir el (los) disolvente(s) en orden. Debe asegurarse de que la solución obtenida, en la adición anterior, sea una solución clara antes de proceder a añadir el siguiente disolvente. Se pueden utilizar métodos físicos como el vórtice, el ultrasonido o el baño de agua caliente para ayudar a la disolución.

Mecanismo de acción (Mechanism of Action)

Características
An improved version of EKI-785.
Targets/IC50/Ki
EGFR
38.5 nM
Src
282 nM
MEK/ERK
800 nM
ErbB2
1.255 μM
Raf
3.353 μM
In vitro
Pelitinib (EKB-569) displays much higher inhibitory activity against EGFR, compared with the closely related c-erbB-2, as well as other kinases such as Src, Cdk4, c-Met, Raf, and MEK/ERK, with IC50 ranging from 282 nM for Src to >20 μM for Cdk4. Consistently, this compound treatment significantly inhibits the autophosphorylation of EGFR but not c-Met in A431 cells. It potently inhibits the proliferation of normal human keratinocytes (NHEK), as well as A431 and MDA-468 tumor cells with IC50 of 61 nM, 125 nM, and 260 nM, respectively, while displaying little activity against MCF-7 cells with IC50 of 3.6 μM. This chemical inhibits EGF-induced phosphorylation of EGFR in A431 and NHEK cells with IC50 of 20-80 nM, as well as the phosphorylation of STAT3 with IC50 of 30-70 nM. It at 75-500 nM also specifically inhibits the activation of AKT and ERK1/2, without affecting NF-κB pathway. In NHEK cells, this compound also potently inhibits TGF-α mediated EGFR activation with IC50 of 56 nM, as well as activation of STAT3 and ERK1/2 with IC50 of 60 nM and 62 nM, respectively.
Ensayo de quinasa
Autofosforilación de EGFR en células
Para experimentos con células en cultivo, las células A431 se tratan con diversas concentraciones de Pelitinib (EKB-569) durante 2,75 horas antes de la co-incubación con 100 ng/mL de EGF durante 0,25 horas. Las células se lavan dos veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) fría antes de añadirles tampón de lisis (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% desoxicolato de sodio, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatina A, 10 mg/mL leupeptina, 20 KIU/mL aprotinina, 2 mM ortovanadato de sodio y 100 mM fluoruro de sodio) durante 20 minutos en hielo, antes de la inmunoprecipitación y el SDS-PAGE-inmunoblotting. Para la inmunoprecipitación, las células cultivadas se colocan en tampón de lisis frío y se homogeneizan inmediatamente en hielo con un Polytron con varios pulsos. El homogeneizado se centrifuga primero a 2500 rpm (20 minutos, 4 °C) y luego de nuevo a 14.000 rpm en una microcentrífuga (10 minutos, 4 °C). Los sobrenadantes (1000 μg de proteína) se incuban durante 2 horas a 4 °C con 15 mL de anticuerpo policlonal anti-EGFR. Después de 2 horas, se añaden 50 μL de perlas de agarosa de proteína G plus/proteína A y se incuban con rotación constante durante 2 horas a 4 °C. Después de lavar con tampón de lisis, las perlas se hierven durante 2 minutos en tampón de muestra de Laemmli. Luego, las proteínas se resuelven mediante SDS-PAGE, se transfieren a una membrana de inmobilón y se sondea durante la noche con un anticuerpo anti-fosfotirosina conjugado con peroxidasa de rábano picante (HRP). Las membranas se revelan utilizando el reactivo ECL. La proteína EGFR total se determina despojando las membranas y volviendo a sondear con anticuerpos específicos del receptor. La cuantificación de las bandas se realiza por densitometría, utilizando el software ImageQuant con un escáner de transmitancia láser Molecular Dynamics.
In vivo
A single oral dose of 10 mg/kg Pelitinib (EKB-569) potently inhibits the EGFR phosphorylation in A431 xenografts with over-expressed EGFR, by 90% within 1 hour, and by >50% after 24 hours. Administration of this compound at 20 mg/kg/day inhibits tumorigenesis in APCMin/+ mice by 87%, equivalent to the effect of used with 2 times doses of EKI-785 (40 mg/kg/day), consistent with greater in vivo potency. This chemical selectively inhibits EGFR signaling in airway epithelial cells in vivo. In the mouse model of airway epithelial remodeling that is inducible by viral infection and features a delayed but permanent switch to goblet cell metaplasia, this compound treatment at 20 mg/kg/day corrects all 3 aspects of epithelial remodeling, by completely blocking the increase of ciliated cells and decrease of Clara cells, and significantly inhibiting the metaplasia of goblet cells.
Referencias