PHA-793887 CDK inhibitor

Multi-CDK inhibitor.

PHA-793887 has low activity against CDK1, CDK4, CDK9 and GSK3β with IC50 of 60 nM, 62 nM, 138 nM and 79 nM, respectively. This compound inhibits cell proliferation of many tumor cell lines, including A2780, HCT-116, COLO-205, C-433, DU-145, A375, PC3, MCF-7, and BX-PC3, with IC50 of 88 nM–3.4 μM. It (1 μM) shows a decrease in the S phase, a subsequent increase of the G1 phase and a slight accumulation of G2/M phase in A2780 cells. This chemical (3 μM) significantly increases G2/M phase and reduces DNA synthsis. [1] It is cytotoxic for leukemic cell lines, including K562, KU812, KCL22, and TOM1, with IC50 of 0.3–7 μM, but it is not cytotoxic for normal unstimulated peripheral blood mononuclear cells or CD34+ hematopoietic stem cells. In colony assays, this compound shows very high activity against leukemia cell lines with IC50 less than 0.1 μM. It induces cell-cycle arrest, inhibits Rb and nucleophosmin phosphorylation, and modulates cyclin E and cdc6 expression at 0.2−1 μM and induces apoptosis at 5 μM. [2]

Ensayo de quinasa CDK

La actividad bioquímica de los compuestos se determina mediante incubación con enzimas y sustratos específicos, seguida de la cuantificación del producto fosforilado. PHA-793887 (1,5 nM–10 μM) se incuba durante 30-90 min a temperatura ambiente en presencia de una mezcla de ATP/³³P-γ-ATP, sustrato y la enzima específica (0,7-100 nM) en un volumen final de 30 μL de tampón de quinasa, utilizando placas de 96 pocillos con fondo en U. Tras la incubación, se detiene la reacción y se separa el sustrato fosforilado del ATP radiactivo no incorporado utilizando perlas SPA, resina Dowex o un filtro de fosfocelulosa Multiscreen de la siguiente manera: (1) Para ensayos SPA. La reacción se detiene añadiendo 100 μL de PBS + 32 mM EDTA + 0,1% Triton X-100 + 500 μM ATP, que contiene 1 mg de perlas SPA recubiertas de estreptavidina. Tras 20 min de incubación para la captura del sustrato, se transfieren 100 μL de la mezcla de reacción a placas Optiplate de 96 pocillos que contienen 100 μL de CsCl 5 M, se dejan reposar durante 4 horas para permitir la estratificación de las perlas en la parte superior de la placa y se cuentan mediante TopCount para medir el fosfato incorporado al sustrato. (2) Para ensayo con resina Dowex. Se añade una cantidad de 150 μL de resina/formiato, pH 3,00, para detener la reacción y capturar el ³³P-γ-ATP que no ha reaccionado, separándolo del sustrato fosforilado en solución. Tras 60 min de reposo, se transfieren 50 μL de sobrenadante a placas Optiplate de 96 pocillos. Tras la adición de 150 μL de Microscint 40, la radiactividad se cuenta en el TopCount. (3) Para ensayo Multiscreen. La reacción se detiene añadiendo 10 μL de EDTA (150 mM). Se transfiere una cantidad de 100 μL a una placa MultiScreen para permitir la unión del sustrato al filtro de fosfocelulosa. A continuación, las placas se lavan tres veces con 100 μL de H₂PO₄ (75 mM) filtrado mediante un sistema de filtración MultiScreen y se secan. Tras la adición de 100 μL de Microscint 0, se cuenta la radiactividad en el TopCount. Los valores de IC50 se obtienen mediante análisis de regresión no lineal.

PHA-793887 (10–30 mg/kg) shows good efficacy in the human ovarian A2780, colon HCT-116, and pancreatic BX-PC3 carcinoma xenograft models. [1] This compound (20 mg/kg) is effective in xenograft models of K562 and HL60 cells, primary leukemic disseminated model, and a high-burden disseminated ALL-2 model derived from a relapsed Philadelphia-positive acute lymphoid leukemia patient. [2]