Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

INCB018424 remt krachtig en selectief JAK2V617F-gemedieerde signalering en proliferatie in Ba/F3-cellen en HEL-cellen. INCB018424 verhoogt de apoptose aanzienlijk op een dosisafhankelijke manier in Ba/F3-cellen. INCB018424 (64 nM) resulteert in een verdubbeling van cellen met gedepolariseerde mitochondria in Ba/F3-cellen. INCB018424 remt de proliferatie van erytroïde progenitorcellen van normale donoren en patiënten met polycythemia vera met een IC50 van respectievelijk 407 nM en 223 nM. INCB018424 toont een opmerkelijke potentie tegen erytroïde kolonieformatie met een IC50 van 67 nM. [1]

INCB018424 (180 mg/kg, oraal, tweemaal daags) resulteert in een overlevingspercentage van meer dan 90% op dag 22 in een JAK2V617F-gestuurd muismodel. INCB018424 (180 mg/kg, oraal, tweemaal daags) vermindert splenomegalie en circulerende niveaus van inflammatoire cytokines aanzienlijk, en elimineert bij voorkeur neoplastische cellen, wat resulteert in een significant verlengde overleving zonder myelosuppressieve of immunosuppressieve effecten in een JAK2V617F-gestuurd muismodel. [1] Het primaire eindpunt wordt bereikt bij 41,9% van de patiënten in de Ruxolitinib-groep in vergelijking met 0,7% in de placebogroep in de dubbelblinde studie van myelofibrose. Ruxolitinib resulteert in het behoud van de vermindering van het miltvolume en een verbetering van 50% of meer in de totale symptoomscore. [2] In totaal heeft 28% van de patiënten in de Ruxolitinib (15 mg tweemaal daags) groep ten minste een 35% vermindering van het miltvolume in week 48 bij patiënten met myelofibrose, vergeleken met 0% in de groep die de best beschikbare therapie kreeg. De gemiddelde palpabele miltlengte is met 56% afgenomen met Ruxolitinib, maar met 4% toegenomen met de best beschikbare therapie in week 48. Patiënten in de ruxolitinib-groep vertonen een verbetering in de algemene kwaliteit van leven en een vermindering van symptomen geassocieerd met myelofibrose. [3]

• Bindingstest

  Recombinante eiwitten worden tot expressie gebracht met Sf21-cellen en baculovirusvectoren en gezuiverd met affiniteitschromatografie. JAK kinase assays gebruiken een homogene tijd-opgeloste fluorescentie assay met het peptidesubstraat (-EQEDEPEGDYFEWLE). Elke enzymreactie wordt uitgevoerd met Ruxolitinib of controle, JAK-enzym, 500 nM peptide, adenosine trifosfaat (ATP; 1mM), en 2% dimethylsulfoxide (DMSO) gedurende 1 uur. De 50% remmende concentratie (IC50) wordt berekend als de INCB018424-concentratie die nodig is voor de remming van 50% van het fluorescentiesignaal.

• Cellijnen

  Ba/F3 and HEL cells

• Concentraties

  3 μM

• Incubatietijd

  48 h

• Methode

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• Dierlijke modellen

  JAK2V617F-driven mouse model

• Doseringen

  180 mg/kg

• Toediening

  o.g.