GW9662

GW9662 bindt aan Cys(285) op PPARgamma, dat geconserveerd is bij alle drie de PPAR's. Deze verbinding fungeert als een antagonist van PPARgamma, wat wordt bevestigd in een test voor de remming van adipocytendifferentiatie. [1] Het voorkomt activering van PPARγ en remt de groei van menselijke mammatumorcellijnen (MCF7, MDA-MB-468, MDA-MB-231) met een IC50 van 20 μM-30 μM, wat suggereert dat deze chemische stof ofwel agonistische eigenschappen heeft voor PPARγ, ofwel groeiremmende mechanismen die onafhankelijk zijn van PPARγ. Gelijktijdige behandeling met deze verbinding (10 μM) resulteert in statistisch significant lagere levensvatbare celnummers na 7 dagen in MDA-MB-231-cellen. [2] PPARγ1-liganden kunnen de RANKL-geïnduceerde osteoclastformatie in primaire murine myeloïde (BM's) en RAW264.7-cellen onderdrukken. Belangrijk is dat de onderdrukking door deze liganden omkeerbaar is op een concentratie-afhankelijke manier met deze chemische stof (2 μM). Het (2 μM) blokkeert IL-4-onderdrukking van osteoclastformatie in BM's. Deze verbinding (1 μM) blokkeert RANKL-activering van NF-κB in RAW264.7-cellen. [3] GW9662 (10 μM) remt hormoon- en agonist-geïnduceerde adipogenese van primaire preadipocyten van patiënten met schildklieroogziekte. [4]

Voorbehandeling met LPS (1 mg/kg i.p.) vermindert significant alle markers van nierletsel en -disfunctie veroorzaakt door ischemie/reperfusie (I/R) letsel bij ratten. Met name deze verbinding (1 mg/kg i.p.) heft de beschermende effecten van LPS op. [5]

• Bindingstest

  De menselijke PPARα-, PPARγ- en PPARδ-ligandbindingsdomeinen (LBD's) worden tot expressie gebracht in E. coli als polyhistidine-gelabelde fusie-eiwitten. Receptoren worden geïmmobiliseerd op SPA-kralen door toevoeging van de gewenste receptor (15 nM) aan een slurry van streptavidin-gemodificeerde SPA-kralen (0,5 mg/mL) in testbuffer. Het mengsel mag minstens 1 uur bij kamertemperatuur equilibreren, en de kralen worden gepelleteerd door centrifugatie bij 1×10³ g. De supernatant wordt weggegooid, en de kralen worden opnieuw gesuspendeerd in het oorspronkelijke volume verse testbuffer met zachtjes mengen. De centrifugatie-/resuspensieprocedure wordt herhaald, en de resulterende slurry van met receptor gecoate kralen wordt onmiddellijk gebruikt of tot 1 week bij 4 ℃ bewaard voor gebruik. [3H]GW2443 worden gebruikt als radioliganden voor de bepaling van competitieve binding aan respectievelijk PPARα, PPARγ en PPARδ. Tenzij anders aangegeven, is de buffer die voor alle tests wordt gebruikt 50 mM HEPES (pH 7), 50 mM NaCl, 5 mM CHAPS, 0,1 mg/mL BSA en 10 mM DTT. Voor sommige experimenten wordt de HEPES (pH 7) vervangen door 50 mM Tris (pH 8).

• Cellijnen

  MDA-MB-231 cells

• Concentraties

  10 μM

• Incubatietijd

  10 days

• Methode

  MDA-MB-231 cells are seeded at a density of 1 × 10⁵ cells per 25 cm³ tissue culture flask. After 24 h (day 0), the growth medium is replaced with fresh medium containing GW9662 (10 μM) or both together. Control flasks receives 0.1% DMSO. Cells are harvested on days 0, 3, 5, 7, 10 for each treatment condition by trypsinisation, stained using trypan blue, and the total and viable number of cells per flask calculates using a haemocytometer.

• Dierlijke modellen

  male Wistar rats

• Doseringen

  1 mg/kg

• Toediening

  intraperitoneal injection