Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC)

N° de catalogueS6928 Lot:S692801

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Données techniques

Formule

C21H11NO5S
Poids moléculaire 389.38 N° CAS 3326-32-7
Solubilité (25°C)* In vitro DMSO 78 mg/mL (200.31 mM)
Ethanol 10 mg/mL (25.68 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Ajoutez les solvants au produit individuellement et dans lordre.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml signifie légèrement soluble ou insoluble.
* Veuillez noter que Selleck teste la solubilité de tous les composés en interne, et la solubilité réelle peut différer légèrement des valeurs publiées. Ceci est normal et est dû à de légères variations dun lot à lautre.
* Expédition à température ambiante (les tests de stabilité montrent que ce produit peut être expédié sans aucune mesure de refroidissement.)

Préparation des solutions mères

Activité biologique

Description Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC, Fluorescein isothiocyanate isomer I, 5-FITC) est une sonde fluorescente capable d'être conjuguée à des tissus et des protéines.
In vitro

1.Préparation des protéines
1) Afin d'obtenir le meilleur effet de marquage, veuillez préparer la concentration de protéines (anticorps) à 2 mg/mL.
2) La valeur du pH de la solution protéique doit être de 8,5±0,5. Si le pH est inférieur à 8,0, du bicarbonate de sodium 1M doit être utilisé pour l'ajustement.
3) Si la concentration en protéines est inférieure à 2 mg/mL, l'efficacité du marquage sera considérablement réduite. Afin d'obtenir la meilleure efficacité de marquage, il est recommandé que la plage de concentration finale en protéines soit de 2-10 mg/mL.
4) La protéine doit être dans le tampon sans amine primaire (comme le Tris ou la glycine) et ion ammonium, sinon l'efficacité du marquage sera affectée.
2.Dye Preparation
Ajouter du DMSO anhydre dans le flacon de Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC) pour obtenir une solution mère de 10 mM. Bien mélanger par pipetage ou vortex.
3.Calcul du dosage du colorant
La quantité de ce composé nécessaire pour la réaction dépend de la quantité de protéine à marquer, et le rapport molaire optimal de celui-ci à la protéine est d'environ 10.
Exemple: en supposant que la protéine marqueur requise est 1 mL 2 mg/mL IgG (MW=150 000), utiliser 1 mL de DMSO pour dissoudre 1 mg de FITC, le volume requis est de 40 μL.
4.Réaction de conjugaison
1) Un bon volume de FITC fraîchement préparé à 10 mg/mL est lentement ajouté à 0,5 mL d'échantillon de protéine. En solution, agiter doucement pour mélanger, puis centrifuger brièvement pour recueillir l'échantillon au fond du tube de réaction. Ne pas trop mélanger pour éviter la dénaturation et l'inactivation des échantillons de protéines.
2) Les tubes de réaction ont été placés dans un endroit sombre et incubés doucement à température ambiante pendant 60 minutes à intervalles. Pendant 10 à 15 minutes, retourner doucement les tubes de réaction plusieurs fois pour mélanger complètement les deux réactifs et augmenter l'efficacité.
5.Purifier la conjugaison
Le protocole suivant est un exemple de purification d'un conjugué colorant-protéine en utilisant une colonne de Sephadex G-25.
1) Préparer la colonne de Sephadex G-25 selon les instructions du fabricant.
2) Charger le mélange réactionnel (de ""Run conjugation reaction"") sur le dessus de la colonne de Sephadex G-25.
3) Ajouter du PBS (pH 7,2-7,4) dès que l'échantillon descend juste en dessous de la surface supérieure de la résine.
4) Ajouter plus de PBS (pH 7,2-7,4) à l'échantillon désiré pour compléter la purification sur colonne.
Combiner les fractions qui contiennent le conjugué colorant-protéine désiré.

Protocole (de référence)

De Selleck Fluorescein-5-isothiocyanate (FITC) A été cité par 1 Publication

Circular RNA circ-MMP11 Contributes to Lapatinib Resistance of Breast Cancer Cells by Regulating the miR-153-3p/ANLN Axis [ Front Oncol, 2021, 11:639961] PubMed: 34295807

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